一，PCR實(shí)驗(yàn)室(shì)的設計(jì)原則
原則(zé)上(shàng)應(yīng)當設置4個(gè)區域：試(shì)劑儲存和(hé)準備(bèi)區(qū)，標本製(zhì)備(bèi)區，擴(kuò)增區，擴增產物分析區。
根(gēn)據(jù)使(shǐ)用儀(yí)器(qì)的功能，區域可(kě)適當(dāng)合(hé)並。
使用(yòng)實時熒(yíng)光PCR儀(yí)，擴(kuò)增(zēng)區(qū)，擴(kuò)增產物分析區可(kě)合(hé)並(bìng)；
采用(yòng)樣本處理，核(hé)酸提取及(jí)擴(kuò)增檢測為(wéi)一體的(dí)自(zì)動化分(fēn)析儀(yí)，則標(biāo)本(běn)製備(bèi)區，擴(kuò)增區，擴增(zēng)產物分析區(qū)可合並。
各(gè)區(qū)功(gōng)能準(zhǔn)備物品清單(dān)：
1，試(shì)劑儲存和準備區（1區(qū)）
功(gōng)能：貯(zhù)存試(shì)劑(jì)的(dí)製備，試(shì)劑的(dí)分(fēn)裝(zhuāng)和擴(kuò)增反(fǎn)應(yīng)混合液的(dí)準(zhǔn)備(bèi)，以及離(lí)心(xīn)管(guǎn)，吸頭等消(xiāo)耗品(pǐn)的(dí)貯存和準備。
準備物(wù)品(pǐn)：
（1）2～8℃和(hé)-20℃以下(xià)冰(bīng)箱(xiāng)
（2）混匀器(qì)
（3）微(wēi)量加樣(yàng)器(qì)（覆蓋0.2-1000µl）
2，標本(běn)製備區（2區(qū)）
功能：核(hé)酸（RNA，DNA）提取(qǔ)，貯存及其(qí)加(jiā)入(rù)至擴(kuò)增(zēng)反應(yīng)管(guǎn)。對(duì)於(yú)涉及(jí)臨床樣(yàng)本(běn)的(dí)操作(zuò)，應符(fú)合(hé)生物安全二(èr)級(jí)實驗室(shì)防護設備，個人防(fáng)護(hù)和操(cāo)作(zuò)規範的要求(qiú)。
準備(bèi)物品(pǐn)：
（1）2-8℃冰箱(xiāng)，-20℃或-80℃冰(bīng)箱
（2）高速(sù)離心機
（3）混匀(yún)器
（4）水浴箱(xiāng)或加熱模塊
（5）微量(liáng)加樣器（覆蓋(gài)0.2-1000µl）
（6）生物安全櫃(guì)。
3，擴增(zēng)區(qū)（3區(qū)）
功能：cDNA合成，DNA擴增及檢(jiǎn)測。
準備物品(pǐn)：核酸(suān)擴增(zēng)儀（或熒光定(dìng)量PCR儀(yí)）
4，擴增產(chǎn)物分析(xī)區（4區）
功(gōng)能：擴(kuò)增片段的(dí)進(jìn)一(yī)步分(fēn)析(xī)測定，如(rú)雜交，酶(méi)切(qiē)電泳(yǒng)，變性(xìng)高效液(yè)相分(fēn)析，測(cè)序等。
準備物品：
（1）雜(zá)交(jiāo)儀，電(diàn)泳(yǒng)儀，測序(xù)儀等
（2）微(wēi)量(liáng)加樣器（覆蓋(gài)0.2-1000µl）
通(tōng)用物品(pǐn)：（4個區都(dū)有可(kě)能需要）
（1）可(kě)移動(dòng)紫外燈（近工作台麵）
（2）消耗(hào)品(pǐn)：一次(cì)性(xìng)手套(tào)，耐(nài)高(gāo)壓處(chǔ)理的離心管和(hé)加(jiā)樣器吸(xī)頭(tóu)
（3）專(zhuān)用工作(zuò)服和工(gōng)作(zuò)鞋(套)
（4）專用(yòng)辦(bàn)公(gōng)用品
（5）樣本管架（2區(qū)）
（6）防爆夾(jiā)（2區）
（7）PCR管架（2區，傳(chuán)遞(dì)窗(chuāng)）
二，PCR實驗(yàn)室工作基本原(yuán)則(zé)
1，進(jìn)入(rù)各工(gōng)作區域應當嚴格按照單(dān)一方向進行
試(shì)劑儲(chǔ)存(cún)和(hé)準備(bèi)區→標(biāo)本製(zhì)備區→擴增(zēng)區→ 擴(kuò)增產物(wù)分析(xī)區。
2，各(gè)工(gōng)作區域必須有(yǒu)明確(què)的標記，不同(tóng)工(gōng)作(zuò)區域內(nèi)的設(shè)備(bèi)，物品(pǐn)不得混(hùn)用。
3，不(bù)同(tóng)的工作(zuò)區(qū)域(yù)使(shǐ)用不同的工(gōng)作(zuò)服（例如不同的(dí)顏(yán)色）。工作人(rén)員(yuán)離(lí)開各工作區(qū)域時(shí)，不得將(jiāng)工(gōng)作服(fú)帶出(chū)。
4，實驗(yàn)室的(dí)清(qīng)潔(jié)應(yīng)當(dāng)按(àn)試劑(jì)貯(zhù)存(cún)和(hé)準備(bèi)區→標本(běn)製(zhì)備(bèi)區→擴增區(qū)→擴增(zēng)產(chǎn)物(wù)分析(xī)區的(dí)方向進行(háng)。不同的(dí)實驗區(qū)域應當有其(qí)各自的(dí)清(qīng)潔用(yòng)具以(yǐ)防止(zhǐ)交(jiāo)叉汙(wū)染。
5，工作(zuò)結(jié)束後，必(bì)須立(lì)即對工作區進(jìn)行(háng)清潔。工(gōng)作區的(dí)實(shí)驗台表(biǎo)麵(miàn)應(yīng)當可(kě)耐受諸如次(cì)氯酸鈉的(dí)化學物(wù)質的(dí)消毒(dú)清(qīng)潔作(zuò)用(yòng)。實驗台表(biǎo)麵的紫外(wài)照(zhào)射應當方便有(yǒu)效。由(yóu)於(yú)紫外照(zhào)射(shè)的(dí)距離和能(néng)量對(duì)去(qù)汙染的效(xiào)果非(fēi)常關(guān)鍵(jiàn)，因(yīn)此可使(shǐ)用可(kě)移(yí)動紫(zǐ)外燈（254nm波長），在工(gōng)作(zuò)完(wán)成後(hòu)調至(zhì)實(shí)驗台上(shàng)60～90cm內照射(shè)。由於擴增(zēng)產物僅幾(jī)百或幾十鹼(jiǎn)基對（bp），對紫(zǐ)外綫損傷(shāng)不敏感，因(yīn)此紫(zǐ)外(wài)照(zhào)射(shè)擴增(zēng)片段(duàn)必須(xū)延長照射時間，最(zuì)好是照射(shè)過夜。
6，實(shí)驗室(shì)的(dí)安全(quán)工作製度或(huò)安全(quán)標準操(cāo)作程序(xù)，所(suǒ)有(yǒu)操作符合《實驗室生物(wù)安全通(tōng)用要求》（GB19489-2008）。
三，注意(yì)事(shì)項(xiàng)
1，試劑(jì)儲存和(hé)準(zhǔn)備區
貯(zhù)存(cún)試劑(jì)和用(yòng)於標(biāo)本(běn)製(zhì)備的消耗(hào)品(pǐn)等(děng)材(cái)料(liào)應當(dāng)直(zhí)接運送(sòng)至試(shì)劑(jì)貯(zhù)存(cún)和(hé)準備區(qū)，不(bù)能(néng)經過擴(kuò)增檢(jiǎn)測區(qū)，試(shì)劑盒中的陽性對(duì)照品及(jí)質控品(pǐn)不應當保(bǎo)存在該區，應當保存在標本(běn)處理區。
2，標(biāo)本製(zhì)備區
由於(yú)在樣本(běn)混(hùn)合，核酸純(chún)化過(guò)程中可(kě)能會(huì)發(fā)生氣溶(róng)膠所致的汙(wū)染，可(kě)通過在本(běn)區內設立(lì)正(zhèng)壓條件，避(bì)免從鄰近(jìn)區進(jìn)入本區的氣(qì)溶膠(jiāo)汙(wū)染(rǎn)。為避免(miǎn)樣(yàng)本間的交(jiāo)叉(chā)汙(wū)染，加入待測(cè)核酸後，必須蓋好含反(fǎn)應混合液(yè)的反(fǎn)應(yīng)管(guǎn)。對(duì)具(jù)有(yǒu)潛在傳染(rǎn)危險性(xìng)的材(cái)料，必須在生(shēng)物安全櫃內(nèi)開蓋，並有明確的(dí)樣(yàng)本(běn)處理和(hé)滅活程序(xù)。
3，擴(kuò)增區
為避免(miǎn)氣(qì)溶(róng)膠所致(zhì)的汙(wū)染(rǎn)，應當(dāng)盡(jìn)量減少在(zài)本區(qū)內的走動。必(bì)須(xū)注意的(dí)是(shì)，所有經(jīng)過檢測(cè)的(dí)反(fǎn)應(yīng)管不得在此區域打(dǎ)開。
4，擴增產(chǎn)物分(fēn)析區
核(hé)酸擴(kuò)增(zēng)後產物(wù)的分(fēn)析方法多(duō)種(zhǒng)多樣，如膜(mó)上或(huò)微(wēi)孔板或芯片(piàn)上探針(zhēn)雜(zá)交(jiāo)方法(fǎ)（放(fàng)射性核素標(biāo)記(jì)或非放(fàng)射(shè)性(xìng)核(hé)素標記），直(zhí)接或酶切後瓊(qióng)脂糖凝膠電(diàn)泳，聚(jù)丙烯酰胺(àn)凝膠(jiāo)電(diàn)泳(yǒng)，Southern轉移(yí)，核(hé)酸測序方(fāng)法，質(zhì)譜(pǔ)分(fēn)析等(děng)。本區是最主要的(dí)擴增產(chǎn)物(wù)汙染來源，因此必須(xū)注意避(bì)免通(tōng)過(guò)本(běn)區(qū)的物(wù)品及(jí)工作服將擴增產物帶出(chū)。在(zài)使用(yòng)PCR-ELISA方法(fǎ)檢(jiǎn)測擴(kuò)增產物(wù)時，必(bì)須使用洗板機洗(xǐ)板(bǎn)，廢液必須(xū)收(shōu)集至1 mol/L HCl中，並且不(bù)能在實驗(yàn)室內(nèi)傾倒(dǎo)，而應當(dāng)至(zhì)遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室(shì)的(dí)地方棄掉。用過的(dí)吸頭(tóu)也必(bì)須放至(zhì)1 mol/L HCl中(zhōng)浸泡(pào)後再放到(dào)垃圾袋中(zhōng)按(àn)程(chéng)序(xù)處理，如焚燒。由(yóu)於(yú)本區有可能會(huì)用(yòng)到某(mǒu)些可(kě)致基(jī)因(yīn)突變(biàn)和有毒(dú)物質如(rú)溴(xiù)化乙錠，丙烯酰胺，甲醛(quán)或放射性核(hé)素等(děng)，故應當注意(yì)實驗人(rén)員的(dí)安全防(fáng)護(hù)。