一，相(xiāng)關法(fǎ)規要求
中國藥典(diǎn)2010年(nián)版(bǎn)《藥品微生(shēng)物實驗室(shì)規(guī)範指導(dǎo)原(yuán)則》中規定微生(shēng)物(wù)實(shí)驗(yàn)室(shì)應(yīng)有(yǒu)符合無菌(jūn)檢(jiǎn)查(chá)法(附錄(lù)XⅢB)和(hé)微(wēi)生物限(xiàn)度檢(jiǎn)查法(附錄(lù)x IIIC)要(yào)求的(dí)，用於具有開(kāi)展無菌檢查，微(wēi)生物(wù)限度(dù)檢查，無菌采樣(yàng)等檢測活(huó)動的，獨立設置的(dí)潔淨室(shì)(區(qū))或(huò)隔離係統(tǒng)，且須(xū)配(pèi)備實驗準(zhǔn)備(bèi)區(qū)，樣(yàng)品接收和貯(zhù)存(cún)區，培養室(shì)，汙染(rǎn)物(wù)處理(lǐ)等區域並顯示標識
。GMP(2010年修訂(dìng)版)第六(liù)十(shí)四(sì)條規定，實驗(yàn)室(shì)的(dí)設計(jì)應(yīng)當(dāng)確保(bǎo)其適(shì)用於預(yù)定的(dí)用(yòng)途(tú)，並能夠避免混淆和交叉汙染
。
二，微(wēi)生物(wù)實(shí)驗(yàn)室(shì)設計布(bù)局現(xiàn)狀及風(fēng)險(xiǎn)
陽(yáng)性對照室(shì)用(yòng)於(yú)菌種的處(chǔ)理，因其汙(wū)染嚴(yán)重藥廠都(dū)已單(dān)設(shè)更衣(yī)室和(hé)緩衝間分室(shì)進行，而無菌檢查，微(wēi)生(shēng)物限度檢查與抗(kàng)生素(sù)微(wēi)生(shēng)物檢定的實(shí)驗室未嚴(yán)格分(fēn)開(kāi)(公(gōng)用更衣(yī)室(shì)及(jí)緩衝間(jiān))
。在GMP檢(jiǎn)查中(zhōng)的(dí)2802條(tiáo)項(xiàng)中明(míng)確規定(dìng)：生物檢(jiǎn)定(dìng)，微生(shēng)物(wù)限(xiàn)度(dù)檢定和放射(shè)性同位(wèi)素檢(jiǎn)定等應分室進(jìn)行，條(tiáo)項解(jiě)釋中提到“無菌室(shì)和微(wēi)生物(wù)限(xiàn)度室(shì)不可公用(yòng)更衣室(shì)及(jí)緩(huǎn)衝(chōng)間(jiān)，防止(zhǐ)汙染無菌(jūn)室"
。公(gōng)用更(gēng)衣室及緩衝間(jiān)勢(shì)必會汙(wū)染(rǎn)無菌(jūn)室，微(wēi)生物(wù)限度(dù)室的(dí)樣(yàng)品(pǐn)是(shì)含菌(jūn)的，汙染(rǎn)無菌(jūn)室(shì)後產品(pǐn)可能出現假(jiǎ)陽(yáng)性的(dí)結果，抗生素(sù)具有抑(yì)菌性(xìng)，汙(wū)染無(wú)菌(jūn)室(shì)後產品可(kě)能出現(xiàn)假陰(yīn)性的(dí)結(jié)果，這樣(yàng)根本無法保(bǎo)證(zhèng)無菌(jūn)檢(jiǎn)查結(jié)果的真實性，也無法就出現(xiàn)的超標結果(guǒ)進行調查，無(wú)菌(jūn)檢查也(yě)就失(shī)去了意義(yì)
。
無菌(jūn)檢(jiǎn)查(chá)室(shì)，微生(shēng)物(wù)限(xiàn)度室(shì)，抗生素微(wēi)生(shēng)物(wù)檢(jiǎn)定，陽(yáng)性(xìng)對照(zhào)實(shí)驗(yàn)室因(yīn)送回風係統設(shè)置(zhì)不合理無法(fǎ)調整(zhěng)壓差，有(yǒu)的(dí)藥(yào)廠不(bù)同實驗(yàn)室的回風(fēng)共用一道“夾牆"，會造成實驗(yàn)室之間的交叉汙染(rǎn)
。對於(yú)要(yào)求無菌的環(huán)境(jìng)(如無(wú)菌(jūn)檢查室(shì)，微(wēi)生物限度檢查室)應該保持(chí)相對(duì)正壓，防(fáng)止有菌區空(kōng)氣進(jìn)入發(fā)生汙染
。對(duì)於(yú)汙(wū)染源(如(rú)陽性(xìng)對(duì)照室，抗生(shēng)素微(wēi)生物檢定室(shì))應該保持(chí)相對負(fù)壓，防(fáng)止汙染物質(zhì)的(dí)擴(kuò)散(sàn)對(duì)實驗結(jié)果和人(rén)員安(ān)全(quán)造成(chéng)影響(xiǎng)
。
微(wēi)生物(wù)檢驗室(shì)通常離生產區較(jiào)遠(yuǎn)，且可能設置在樓(lóu)層上(shàng)，有的(dí)藥廠在微生物(wù)檢(jiǎn)驗(yàn)室(shì)的(dí)潔(jié)淨區(qū)內(nèi)用飲用水作為(wéi)清潔用水(shuǐ)，用於人(rén)員的洗(xǐ)手(shǒu)和房間的清潔，飲用水中含有(yǒu)大(dà)量的細(xì)菌和不溶性(xìng)微粒，會對(duì)無菌環境造(zào)成(chéng)破壞(huài)
。有的藥廠微(wēi)生物檢(jiǎn)驗室(shì)采用明(míng)管(guǎn)排水
。
微生物(wù)檢驗(yàn)室潔(jié)淨(jìng)區(qū)的內表麵(miàn)不平整(zhěng)，如(rú)照明燈(dēng)，壓差計未(wèi)采(cǎi)用嵌(qiàn)入式安裝，不(bù)易進行清(qīng)潔和El常(cháng)擦拭(shì)消毒
。有菌區(qū)和(hé)無菌區的潔(jié)具混(hùn)用(yòng)，帶(dài)來(lái)交叉汙染(rǎn)
。無菌(jūn)區(qū)的清(qīng)潔(jié)用具沒有(yǒu)經(jīng)過(guò)滅菌(jūn)處理(lǐ)，消毒液沒(méi)有(yǒu)經過除菌過濾(lǜ)，無(wú)菌(jūn)區(qū)的(dí)環境從而(ér)遭(zāo)到破(pò)壞，影(yǐng)響實驗結果(guǒ)
。
三，微生(shēng)物(wù)實驗(yàn)室設計要(yào)求(qiú)
微生物實(shí)驗(yàn)室(shì)的(dí)布(bù)局，設(shè)計(jì)和(hé)建造(zào)應(yīng)有(yǒu)利於避(bì)免交叉(chā)汙(wū)染，便於(yú)清(qīng)潔(jié)及日常維(wéi)護，以(yǐ)保(bǎo)證高潔(jié)淨度的(dí)無菌實(shí)驗環境(jìng)；其次，人和物是(shì)潔(jié)淨(jìng)區的(dí)主要(yào)汙染源(yuán)
。因(yīn)此(cǐ)，必(bì)須對係(xì)統(tǒng)的(dí)操(cāo)作人員(yuán)進行培(péi)訓，讓(ràng)其充(chōng)分掌握係統(tǒng)的運行(háng)要求(qiú)，使實(shí)驗用品，人帶(dài)來的汙染(rǎn)得到有效(xiào)控製(zhì)
。在(zài)人(rén)，物流(liú)的設計和(hé)管(guǎn)理(lǐ)上(shàng)，基本原則是不經過淨化處(chǔ)理的人(rén)，不經(jīng)消(xiāo)毒滅(miè)菌(jūn)的(dí)物(wù)品(pǐn)不能(néng)進入(rù)無(wú)菌區域
。
1，人(rén)員流(liú)動(dòng)
根(gēn)據(jù)GM2010版修(xiū)訂版(bǎn) 要(yào)求(qiú)，人，物(wù)流分開
。4個(gè)實(shí)驗(yàn)室擁有獨(dú)立(lì)的(dí)更衣係(xì)統，避(bì)免交叉汙染(rǎn)
。物(wù)品集(jí)中通(tōng)過潔(jié)淨互(hù)鎖(suǒ)傳遞(dì)窗(chuāng)傳(chuán)遞，對(duì)於大容(róng)量(liáng)注射劑(jì)檢品量大的問(wèn)題，防止(zhǐ)頻繁(fán)開(kāi)啟(qǐ)傳(chuán)遞窗(chuāng)造成(chéng)無菌檢(jiǎn)查(chá)室環(huán)境的(dí)破壞(huài)，物料(liào)經外清緩衝(chōng)間(jiān)傳入無(wú)菌(jūn)檢(jiǎn)查(chá)室(shì)
。所有的(dí)樣品經75％酒精(jīng)在(zài)樣(yàng)品(pǐn)準(zhǔn)備室擦拭後(hòu)傳入相(xiāng)應實驗(yàn)室(shì)，其他器具均需(xū)滅(miè)菌後傳入(rù)
。
美(měi)國藥典規定，用(yòng)於進行無(wú)菌(jūn)檢驗的設施(shī)與用於(yú)製(zhì)藥的設(shè)施(shī)應該(gāi)是一致(zhì)的，並(bìng)規定(dìng)，用於無菌檢(jiǎn)驗的設施(shī)不應(yīng)比(bǐ)無(wú)菌(jūn)加工(gōng)生產設施造成(chéng)更多的微生物汙(wū)染幾(jī)率
。因此，合(hé)理的(dí)設計應該包(bāo)括更衣(yī)區(qū)域(yù)和通(tōng)過氣閘
。環境的(dí)監(jiān)測和(hé)著裝應該與藥品生產中相一(yī)致(zhì)
。根據(jù)風(fēng)險管(guǎn)理的原(yuán)則，對(duì)於要求相(xiāng)對(duì)無菌(jūn)環(huán)境的無菌檢查室(shì)(B+A)和微(wēi)生物限(xiàn)度檢查室(shì)(c+A)基(jī)本采(cǎi)用嵌(qiàn)套式設計
。
無菌檢查(chá)室和微(wēi)生物限度室要(yào)求檢(jiǎn)測環境無(wú)菌的，需(xū)把操(cāo)作人員所用潔淨服進行(háng)包裹(guǒ)以(yǐ)防止(zhǐ)汙染，無(wú)菌檢(jiǎn)查室和微(wēi)生(shēng)物(wù)限度室內(nèi)操作人(rén)員(yuán)不能超過2名
。無(wú)菌(jūn)服經(jīng)清(qīng)洗後裝入呼吸袋內在(zài)雙扉(fēi)脈動(dòng)真(zhēn)空(kōng)滅(miè)菌櫃進行滅(miè)菌，在(zài)進入無菌區時(shí)裝(zhuāng)有(yǒu)無菌(jūn)服的(dí)呼(hū)吸(xī)袋(dài)帶(dài)入
。需製(zhì)定SOP對(duì)更衣過程中的(dí)每(měi)一個細(xì)節進行規範，更衣的程序(xù)為(wéi)：脫(tuō)衣-洗(xǐ)手(shǒu)消(xiāo)毒(dú)-帶(dài)手(shǒu)套(tào)脫(tuō)鞋-穿無菌鞋-穿無菌(jūn)內服-脫手套-帶手套-穿(chuān)無(wú)菌外(wài)服-帶無(wú)菌(jūn)手套(tào)
。此外(wài)，陽性(xìng)對照室(shì)的(dí)潔(jié)淨(jìng)級別可(kě)設計為C+A，效價(jià)測定(dìng)室(shì)的潔淨級別(bié)可(kě)設計為(wéi)D級
。
2，物流(liú)
進入的物流與人流(liú)應(yīng)嚴(yán)格(gé)分(fēn)開(kāi)，每個(gè)實驗室都有(yǒu)單獨的(dí)傳遞窗傳(chuán)遞(dì)樣(yàng)品和(hé)實驗用(yòng)具(jù)，所有(yǒu)樣(yàng)品必須用75％的酒(jiǔ)精在樣(yàng)品擦拭(shì)區進行(háng)擦拭(shì)，用於(yú)無菌區(qū)的實(shí)驗用具必(bì)須經(jīng)滅菌後(hòu)才能傳入，滅(miè)菌的(dí)效(xiào)果應當(dāng)經過驗(yàn)證(zhèng)，傳(chuán)遞窗必須裝有紫外燈(dēng)進(jìn)行消毒(dú)，需(xū)定期對其消毒效(xiào)果(guǒ)進(jìn)行評價以便及時更換(huàn)紫外(wài)燈管
。對於(yú)陽(yáng)性對照(zhào)實驗(yàn)室可能產生的(dí)嚴重(zhòng)汙(wū)染(rǎn)物(wù)宜通(tōng)過(guò)專用(yòng)的(dí)傳(chuán)遞(dì)窗傳(chuán)遞，並(bìng)做滅(miè)活(huó)處理
。各實(shí)驗(yàn)室(shì)的潔(jié)具(jù)單獨存放，防止交叉(chā)汙(wū)染
。
3，空調係統(tǒng)整個(gè)係統(tǒng)可采(cǎi)用1台(tái)潔(jié)淨空調(tiáo)，因無菌檢(jiǎn)查室和微生(shēng)物(wù)限度(dù)室內的空氣質量較高(gāo)可經回風循(xún)環利用(yòng)
。為避免交(jiāo)叉(chā)汙染(rǎn)，抗生(shēng)素(sù)微(wēi)生(shēng)物檢定(dìng)室，陽(yáng)性對照室(shì)不(bù)回風，采(cǎi)用(yòng)全排，並采(cǎi)用“豎井"式回風(fēng)，單閥單控(kòng)，保(bǎo)證(zhèng)壓(yā)差(chà)
。
無(wú)菌檢(jiǎn)查室(shì)和穿無菌外衣兩個房(fáng)間須(xū)達到(dào)B級要求(qiú)，因(yīn)其操(cāo)作人員僅限(xiàn)於(yú)1人(rén)，發塵量(liáng)較(jiào)少，可參(cān)考ISPE(國際製藥工(gōng)程協(xié)會)將換氣(qì)次數設(shè)為(wéi)40~60次(cì)／h，C級(jí)區的換(huàn)氣(qì)次數(shù)設為(wéi)20~40次／h，確(què)定層(céng)高後便(biàn)可以確定(dìng)空調的額定(dìng)風(fēng)量(liáng)，但必(bì)須考(kǎo)慮風量(liáng)的(dí)損(sǔn)耗
。空調(tiáo)係(xì)統必(bì)須全(quán)天(tiān)24 h開(kāi)啟， 以(yǐ)維持(chí)正(zhèng)壓(yā)防止(zhǐ)汙(wū)染
。因(yīn)故停(tíng)機(jī)必須(xū)驗證(zhèng)
。
4，水(shuǐ)係統
實驗(yàn)室(shì)通(tōng)常(cháng)離純化(huà)水製水(shuǐ)間較遠，宜(yí)購買小(xiǎo)型(xíng)純化水機(jī)用於無(wú)菌區人(rén)員洗手(shǒu)，衛生(shēng)清潔，儀(yí)器(qì)清洗等，純化(huà)水(shuǐ)即(jí)製(zhì)即(jí)用，並(bìng)經除(chú)菌(jūn)過濾(lǜ)後使(shǐ)用
。飲用(yòng)水(shuǐ)含(hán)有：大(dà)量(liáng)的細(xì)菌(jūn)會(huì)對(duì)實驗(yàn)室的環(huán)境(jìng)造成(chéng)破(pò)壞(huài)
。水的輸送管綫要有一定的坡度(dù)，采用步步(bù)低(dī)的(dí)方(fāng)式，管道殘留在設(shè)置的zui低(dī)點(diǎn)進(jìn)行(háng)排(pái)放(fàng)
。應(yīng)設夾層放置(zhì)排(pái)水(shuǐ)管綫(xiàn)
。
5，潔(jié)淨裝(zhuāng)修(xiū)
整個(gè)實驗(yàn)室(shì)的潔淨(jìng)裝修(xiū)施(shī)工必須符(fú)合GB 50591—2010《潔(jié)淨(jìng)室(shì)施工及(jí)驗(yàn)收規範(fàn)》的(dí)要求
。
四，微生(shēng)物實(shí)驗室管(guǎn)理
按照中國(guó)藥典2010版《藥品微生(shēng)物實驗室規(guī)範(fàn)指(zhǐ)導原(yuán)則(zé)》要(yào)求，微(wēi)生物實驗人員應具(jù)備微生物學(xué)的(dí)教育背景，應經(jīng)培(péi)訓並(bìng)授(shòu)權方可(kě)上崗
。在(zài)微生(shēng)物(wù)實(shí)驗室(shì)的(dí)入(rù)口應(yīng)設(shè)置門(mén)禁裝(zhuāng)置(zhì)，隻(zhī)允許微(wēi)生(shēng)物實驗人(rén)員(yuán)進入
。還(huán)應定(dìng)期對(duì)其(qí)進行(háng)無(wú)菌(jūn)操作後的無菌服(fú)表麵(miàn)進(jìn)行監測，防止(zhǐ)人為差(chà)錯
。
1，環境監測
應定(dìng)期對微(wēi)生物實驗(yàn)室(shì)的環(huán)境(jìng)進(jìn)行(háng)監(jiān)測(cè)， 以確保(bǎo)環(huán)境處於受(shòu)控(kòng)狀態，包(bāo)括沉(chén)降菌，浮(fú)遊(yóu)菌，塵埃(āi)粒子，設備(bèi)表麵監(jiān)測(cè)，高效(xiào)過濾器(qì)檢漏，請(qǐng)參照相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準，設定適宜(yí)的(dí)監測頻率(shuài)進行環(huán)境(jìng)監(jiān)測(cè)
。
2，清潔(jié)消毒
微(wēi)生物實驗室中無(wú)菌區域應(yīng)盡(jìn)量(liáng)減少“陰陽角"，便於(yú)無菌(jūn)室(shì)日(rì)常的擦拭消毒(dú)，無菌(jūn)區所用的潔(jié)具(jù)應經滅菌(jūn)處理，所用(yòng)的(dí)水(shuǐ)消毒(dú)劑應(yīng)經(jīng)除(chú)菌(jūn)過濾
。有菌(jūn)區(qū)和無菌區的潔(jié)具不能共用，應(yīng)在潔(jié)具(jù)顏色上(shàng)加(jiā)以(yǐ)區(qū)分
。