1，目的(dí)
建(jiàn)立(lì)無(wú)菌室浮(fú)遊菌測(cè)試(shì)標(biāo)準操作程(chéng)序，規範無菌室浮(fú)遊(yóu)菌(jūn)的檢測(cè)。
2，範圍
適用(yòng)於無(wú)菌室(shì)（包(bāo)括潔(jié)淨(jìng)工作台(tái)）浮遊(yóu)菌(jūn)的測(cè)試(shì)和(hé)環境驗證。
3，職(zhí)責
QA，QC人員遵照(zhào)執行。
4，內容
4.1參考(kǎo)標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 16293-2010
4.2測(cè)試方(fāng)法
本測試方法(fǎ)為計(jì)數濃度法，即通過收集懸浮(fú)在(zài)空氣中(zhōng)的生(shēng)物性粒(lì)子(zǐ)於(yú)專門(mén)的培養基(jī)（選(xuǎn)擇能(néng)證實(shí)其(qí)能夠支持微生(shēng)物(wù)生長的培(péi)養(yǎng)基(jī)），經若幹時間和適(shì)宜(yí)的(dí)生(shēng)長條(tiáo)件讓其(qí)繁殖到(dào)可(kě)見(jiàn)的菌落計(jì)數，以(yǐ)判定該無菌(jūn)室的微(wēi)生物濃(nóng)度。
4.3測試儀器，輔助設備和培養(yǎng)基(jī)
浮遊(yóu)菌(jūn)采樣(yàng)器，培養皿(mǐn)（選用(yòng)與(yǔ)儀(yí)器相(xiāng)適應的(dí)培(péi)養(yǎng)皿），培養基(jī)，恒溫培(péi)養(yǎng)箱(xiāng)，高壓蒸汽滅菌(jūn)器(qì)。
4.4測試狀(zhuàng)態及(jí)測試(shì)時間
4.4.1靜態(tài)和(hé)動態兩種狀態均可(kě)進行(háng)測試(shì)，靜態(tài)測試時，室內測(cè)試(shì)人(rén)員不(bù)得多於2人。
4.4.2在(zài)靜(jìng)態a測試時，單向流(liú)無菌室(shì)（區(qū)），測(cè)試在淨(jìng)化空(kōng)調(tiáo)係統(tǒng)正常運行(háng)時(shí)間(jiān)不(bù)少(shǎo)於10分鐘(zhōng)後(hòu)開始；非(fēi)單(dān)向流(liú)無(wú)菌(jūn)室（區），測試在淨(jìng)化空(kōng)調係(xì)統正常運行(háng)不(bù)少於30分(fēn)鐘(zhōng)後開始(shǐ)。在(zài)靜態b測試(shì)時(shí)，單向(xiàng)流無(wú)菌(jūn)室（區(qū)），測試在生(shēng)產(chǎn)操作人(rén)員(yuán)撤離現場(cháng)並經過10分鐘(zhōng)自淨後開始；非(fēi)單(dān)向流(liú)無菌(jūn)室（區(qū)），測(cè)試在(zài)生(shēng)產(chǎn)操作(zuò)人(rén)員撤離現場並經(jīng)過(guò)20分(fēn)鐘(zhōng)自(zì)淨(jìng)後開(kāi)始。
4.5采樣(yàng)點的確定(dìng)
4.5.1zui少采樣(yàng)點(diǎn)數(shù)目(mù)見(jiàn)表1，每次zui小(xiǎo)采(cǎi)樣(yàng)量見(jiàn)表2。
表(biǎo)1 zui少(shǎo)采樣點數目(mù)：

表(biǎo)2 zui小(xiǎo)采樣量：

4.5.2采樣點位置(zhì)布(bù)置宜力(lì)求均(jūn)匀(yún)，避(bì)免采樣(yàng)點(diǎn)在(zài)局部(bù)區(qū)域(yù)過(guò)於稀(xī)疏，采(cǎi)樣(yàng)點按照《潔淨(jìng)區環(huán)境(jìng)監控管理(lǐ)規(guī)程(chéng)》附件×××車間(jiān)潔(jié)淨(jìng)度(dù)監測采樣點布局圖的要(yào)求布置(zhì)，每個(gè)采(cǎi)樣點一(yī)般采樣一(yī)次(cì)。
4.5.3工(gōng)作區(qū)采樣(yàng)點(diǎn)位置(zhì)離(lí)地0.8m~1.5m左右(yòu)（略高(gāo)於工作(zuò)麵），送風口測點位(wèi)置離開送風麵30cm左右，可在(zài)關鍵(jiàn)設備或(huò)關(guān)鍵(jiàn)工作活(huó)動範圍處(chǔ)增加(jiā)測點(diǎn)。
4.6測試(shì)準(zhǔn)備(bèi)
4.6.1采樣器在進入被(bèi)測(cè)區(qū)域前先清潔表(biǎo)麵，然後用75%酒精(jīng)消毒一遍或(huò)存放於(yú)被測區域(yù)內，與被測(cè)試(shì)區域一(yī)起(qǐ)消毒(dú)（用(yòng)於*無(wú)菌室(shì)的采(cǎi)樣(yàng)器必須預(yù)先(xiān)放在(zài)被測房間(jiān)內）。
4.6.2A/B級區采用一(yī)次性(xìng)培養(yǎng)皿，其(qí)它(tā)區(qū)域按(àn)無菌(jūn)操(cāo)作(zuò)要(yào)求，在(zài)中檢(jiǎn)室潔淨(jìng)工作台(tái)上提前(qián)製(zhì)備(bèi)培養備用(yòng)（將滅菌後的(dí)培養基用水浴溶(róng)解，冷卻(què)至(zhì)約50-60℃，Φ90mm培養皿每個(gè)傾注約20ml培養(yǎng)基，Φ150mm培(péi)每(měi)個傾注(zhù)約30ml培(péi)養基(jī)），培養(yǎng)皿(mǐn)加蓋(gài)後在(zài)室溫下放(fàng)至(zhì)凝固。自製好(hǎo)的培(péi)養皿(mǐn)在(zài)無菌(jūn)室(shì)內存放(fàng)不超過48小(xiǎo)時，2~8℃保存的(dí)培(péi)養皿(mǐn)一(yī)般不超過(guò)1周，一次性(xìng)培養皿(mǐn)在標注的(dí)有效期內(nèi)使用，過期不(bù)得(dé)使用(yòng)。
4.6.3A/B級區(qū)使用的培養皿(mǐn)在區(qū)域(yù)消毒(dú)前(qián)一(yī)次性傳入(rù)，隨(suí)環(huán)境(jìng)一起消(xiāo)毒(dú)，在消(xiāo)毒液(yè)取用間架子上暫存(cún)，在有效期(qī)內(nèi)使(shǐ)用。若需(xū)臨(lín)時(shí)傳(chuán)入，則必須(xū)在前一(yī)天(tiān)臭(chòu)氧消毒前通過C級(jí)與(yǔ)B級(jí)傳遞窗傳入B級(jí)區進行臭氧(yǎng)消毒(dú)，第(dì)二天(tiān)使用。傳(chuán)入前表麵(miàn)也(yě)必(bì)須用75%酒精(jīng)擦(cā)拭。其它(tā)區域(yù)用培養(yǎng)皿(mǐn)按物品(pǐn)傳入要(yào)求當天(tiān)傳(chuán)入使(shǐ)用。
4.6.4采樣前，先用(yòng)75%酒精清洗(xǐ)采樣器的頂蓋，轉(zhuǎn)盤以及(jí)罩子(zǐ)的(dí)內外麵(miàn)（FKC型(xíng)浮遊空氣塵(chén)菌(jūn)采(cǎi)樣(yàng)器用酒(jiǔ)精清洗(xǐ)采樣頭）。
4.6.5測(cè)試(shì)具體(tǐ)操作見浮(fú)遊菌采樣(yàng)器標準(zhǔn)操作程序(xù)或浮遊空氣塵(chén)菌采(cǎi)樣(yàng)器標(biāo)準操作(zuò)程(chéng)序。
4.6.6采樣(yàng)結(jié)束(shù)後，蓋(gài)上培養皿(mǐn)蓋(gài)子(zǐ)，在(zài)培(péi)養皿(mǐn)上(shàng)標注(zhù)所(suǒ)有信(xìn)息（包括產(chǎn)品批(pī)號(hào)，放置位置(zhì)等），將(jiāng)培養(yǎng)皿用適宜(yí)的方式捆紮，倒置於30~35℃恒(héng)溫(wēn)培(péi)養箱中(zhōng)培養，培養時間不少於(yú)2天(tiān)。
4.6.7培養(yǎng)結(jié)束(shù)後(hòu)逐(zhú)個(gè)檢查培養皿，用(yòng)肉眼對(duì)培養(yǎng)皿上(shàng)所有(yǒu)的菌(jūn)落直(zhí)接計數，標(biāo)記，然後用(yòng)5~10倍(bèi)放大(dà)鏡檢查，有否遺漏(lòu)。若培(péi)養皿上有2個或2個以上(shàng)的菌(jūn)落重(zhòng)疊，可(kě)分辨時仍以2個或2個以(yǐ)上菌落計(jì)數(shù)。
4.7測試記(jì)錄應(yīng)包含以下(xià)內(nèi)容
4.7.1被(bèi)測試(shì)區(qū)域名稱，測試日期(qī)，測試依據(jù)，測(cè)試者姓名(míng)，測(cè)試儀器(qì)及測(cè)試方法的描(miáo)述，測(cè)試(shì)時(shí)所(suǒ)采(cǎi)用的狀(zhuàng)態和室內測(cè)試人員數(shù)，采(cǎi)樣(yàng)點數目，測試(shì)次數(shù)，采樣(yàng)流量，測試(shì)結果(guǒ)（包(bāo)括所有統計計(jì)算資料(liào)）等(děng)。
4.7.2若為(wéi)動態(tài)測(cè)試(shì)，還(huán)應(yīng)記錄現場(cháng)操(cāo)作人員數量(liáng)，現(xiàn)場設備(bèi)運轉情(qíng)況(kuàng)等(děng)。
4.8結果計(jì)算(suàn)
4.8.1用計數(shù)方(fāng)法得出各個(gè)培養皿(mǐn)的菌落數。
4.8.2每(měi)個測點的浮遊菌(jūn)平均濃度計(jì)算(suàn)按(àn)下(xià)式進(jìn)行。
4.9結(jié)果評定
4.9.1每個測點(diǎn)的浮遊(yóu)菌平均濃(nóng)度必須(xū)低於(yú)所(suǒ)選(xuǎn)定評定(dìng)標(biāo)準(zhǔn)中的(dí)界限。
4.9.2在(zài)靜態測(cè)試(shì)時，若某測點的(dí)浮(fú)遊(yóu)菌(jūn)平均(jūn)菌濃度(dù)超(chāo)過評定(dìng)標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)重新采(cǎi)樣兩(liǎng)次，兩(liǎng)次測(cè)試結果均合(hé)格才能判(pàn)為(wéi)符(fú)合(hé)。
4.9.3若有超(chāo)過規(guī)定(dìng)者，必須(xū)及(jí)時與生產(chǎn)部(bù)門(mén)，對該區域進(jìn)行消(xiāo)毒或(huò)其它處理，然(rán)後重(zhòng)新測(cè)試至(zhì)合(hé)格。
4.10日常監(jiān)控
4.10.1浮遊菌(jūn)日常監控設糾偏(piān)限度(dù)和警(jǐng)戒(jiè)限度(dù)（限度範(fàn)圍及(jí)取(qǔ)樣頻(pín)次(cì)見《潔(jié)淨(jìng)區環境(jìng)監控管理規程(chéng)》），以(yǐ)保證無菌室（區）的微(wēi)生物濃度受到控製(zhì)，定期(qī)檢(jiǎn)測以檢(jiǎn)查(chá)微生物(wù)負荷以及(jí)消(xiāo)毒劑的效力，並作(zuò)傾(qīng)向(xiàng)分(fēn)析(xī)。靜態和動態(tài)的(dí)監控都(dū)可(kě)以采(cǎi)用(yòng)該方法。
4.10.2對於(yú)浮遊菌(jūn)的取樣頻次(cì)，如果出(chū)現下(xià)列情況應(yīng)考慮(lǜ)修(xiū)改，在評估(gū)以(yǐ)下情況(kuàng)後，也應確定(dìng)其他項目(mù)的(dí)檢測(cè)頻次。
（1）連(lián)續(xù)超(chāo)過(guò)糾(jiū)偏(piān)限度(dù)和警(jǐng)戒(jiè)限度(dù)；
（2）停工(gōng)時間比預計延長；
（3）關鍵(jiàn)區(qū)域內發現(xiàn)有汙染存在(zài)；
（4）在(zài)生產期(qī)間，空氣(qì)淨(jìng)化係(xì)統(tǒng)進行任何重大(dà)的維修；
（5）日(rì)常(cháng)操作記(jì)錄(lù)反(fǎn)映出傾(qīng)向(xiàng)性(xìng)的數據；
（6）消(xiāo)毒(dú)規(guī)程(chéng)的改變；
（7）引起(qǐ)生物(wù)汙染的事(shì)故等；
（8）當(dāng)生(shēng)產設備有重大維修(xiū)或增加設備時(shí)；
（9）當(dāng)無(wú)菌(jūn)室（區(qū)）結構或(huò)區域分布有(yǒu)重(zhòng)大變動時。
4.11注(zhù)意事(shì)項(xiàng)
4.11.1JYQ-Ⅱ型(xíng)浮遊(yóu)菌采樣(yàng)器(qì)經(jīng)消(xiāo)毒後先不放入培養皿(mǐn)，開啟浮(fú)遊(yóu)菌采(cǎi)樣(yàng)器，使(shǐ)儀(yí)器中(zhōng)的殘餘消(xiāo)毒劑(jì)蒸(zhēng)發(fā)，時(shí)間(jiān)不(bù)少於5分(fēn)鐘(zhōng)，檢查流量(liáng)並(bìng)根據(jù)采(cǎi)樣量(liáng)調整(zhěng)設(shè)定采(cǎi)樣(yàng)時間。
4.11.2單向(xiàng)流(liú)無菌室(shì)（區(qū)）或送(sòng)風口(kǒu)，采(cǎi)樣(yàng)器采(cǎi)樣口朝向應(yīng)正(zhèng)對(duì)氣流(liú)方向(xiàng)，非單向(xiàng)流無(wú)菌室（區(qū)），采(cǎi)樣(yàng)口向上。
4.11.3測試(shì)時必(bì)須穿著與被測區(qū)域(yù)潔(jié)淨度(dù)級別要求(qiú)相適(shì)應(yīng)並經(jīng)高壓滅菌後的無(wú)菌(jūn)服。
4.11.4布(bù)置采樣(yàng)點(diǎn)時(shí)，至少應盡量避開塵粒(lì)較集中的(dí)回風(fēng)口(kǒu)。
4.11.5采(cǎi)樣結束，需(xū)用(yòng)75%酒精噴(pēn)射采(cǎi)樣器(qì)罩子的內(nèi)壁(bì)和(hé)轉(zhuǎn)盤（FKC型浮(fú)遊(yóu)空氣塵菌采(cǎi)樣(yàng)器噴射(shè)采樣頭和保(bǎo)護(hù)蓋）。
4.11.6應采取一切措施防(fáng)止采(cǎi)樣(yàng)過程(chéng)的汙染和(hé)其(qí)他可(kě)能對(duì)樣本的汙染。
4.11.7每批(pī)培養基(jī)應(yīng)有(yǒu)對照試驗，檢驗培養基(jī)本身是否汙染，可(kě)每批(pī)選定(dìng)3隻(zhī)培(péi)養(yǎng)皿作(zuò)為(wéi)對(duì)照(zhào)培(péi)養(yǎng)；培養(yǎng)皿在用(yòng)於檢測時，為避免(miǎn)培養皿運(yùn)輸(shū)或搬(bān)動(dòng)過(guò)程造(zào)成的(dí)影(yǐng)響，宜同(tóng)時(shí)進行(háng)對照試(shì)驗(yàn)，每次或(huò)每個區域(yù)取(qǔ)1個對(duì)照(zhào)皿，與采(cǎi)樣皿(mǐn)同法操作但不需暴露采(cǎi)樣，然(rán)後與(yǔ)采樣(yàng)後的培養皿(mǐn)一起放入培養箱(xiāng)中(zhōng)培(péi)養，結(jié)果應無(wú)菌落生(shēng)長(cháng)。
4.11.8采(cǎi)樣前應仔細(xì)檢(jiǎn)查每個培(péi)養(yǎng)皿(mǐn)的質量，如(rú)發現(xiàn)變(biàn)質(zhì)，破(pò)損或汙染的應剔除。
4.11.9由於(yú)細菌種(zhǒng)類(lèi)繁(fán)多(duō)，差(chà)別甚大(dà)，計(jì)數時(shí)一(yī)般用透射光於於(yú)培養(yǎng)皿背麵(miàn)或正(zhèng)麵(miàn)仔細觀察(chá)，不要漏計培養(yǎng)皿(mǐn)邊緣生(shēng)長(cháng)的(dí)菌(jūn)落(là)，並須注(zhù)意(yì)細菌(jūn)菌落或培(péi)養基沉(chén)澱(diàn)物(wù)的(dí)區別(bié)，必要時用(yòng)顯(xiǎn)微(wēi)鏡鑒(jiàn)別。
4.11.10必須(xū)定期對恒(héng)溫(wēn)培(péi)養箱進行校驗(yàn)。