1，目的：建(jiàn)立無(wú)菌室(shì)浮遊菌測試(shì)標(biāo)準(zhǔn)操作(zuò)程(chéng)序，規範無菌室(shì)浮遊(yóu)菌的檢(jiǎn)測
。
2，範(fàn)圍：適用於(yú)無菌(jūn)室（包括潔(jié)淨工作(zuò)台）浮遊(yóu)菌的測試(shì)和環境驗證(zhèng)
。
3，職責：QA，QC人(rén)員遵照執(zhí)行(háng)
。
4，內(nèi)容：
4.1 參考標準(zhǔn)：GB/T 16293-2010
4.2 測試(shì)方法
本(běn)測(cè)試方法為(wéi)計(jì)數濃(nóng)度(dù)法(fǎ)，即通過收(shōu)集懸(xuán)浮(fú)在(zài)空氣中的生物性(xìng)粒子於(yú)專(zhuān)門(mén)的培養基（選擇能證實(shí)其能夠(gòu)支持微生物(wù)生長的(dí)培養(yǎng)基），經若幹(gān)時間和(hé)適宜的生(shēng)長條(tiáo)件讓其(qí)繁(fán)殖到(dào)可(kě)見的(dí)菌(jūn)落計(jì)數，以(yǐ)判定該無菌室(shì)的微生(shēng)物(wù)濃度
。
4.3 測試儀(yí)器，輔助(zhù)設(shè)備(bèi)和(hé)培養(yǎng)基(jī)
浮遊(yóu)菌(jūn)采樣器(qì)，培(péi)養皿（選用與(yǔ)儀(yí)器(qì)相適應的培養皿），培養基(jī)，恒(héng)溫培養(yǎng)箱，高(gāo)壓蒸(zhēng)汽滅(miè)菌(jūn)器
。
4.4 測(cè)試狀(zhuàng)態及(jí)測(cè)試時間(jiān)
4.4.1 靜態(tài)和動態(tài)兩種(zhǒng)狀(zhuàng)態均可進行測試(shì)，靜態測試時，室內測試人員不得多(duō)於2人
。
4.4.2 在靜(jìng)態(tài)a測試時，單(dān)向(xiàng)流(liú)無(wú)菌(jūn)室(shì)（區），測試(shì)在淨化(huà)空調係(xì)統正常(cháng)運行(háng)時間不少於10分鐘後開始
；非單向流無菌(jūn)室（區），測(cè)試在淨(jìng)化空調(tiáo)係統正常運(yùn)行不(bù)少於(yú)30分(fēn)鐘後開(kāi)始
。在靜(jìng)態(tài)b測試時(shí)，單(dān)向(xiàng)流(liú)無(wú)菌(jūn)室（區(qū)），測試在(zài)生(shēng)產操作人員(yuán)撤(chè)離現場並(bìng)經(jīng)過10分(fēn)鐘(zhōng)自淨後(hòu)開(kāi)始(shǐ)
；非單(dān)向流無菌室(shì)（區），測試在生(shēng)產操(cāo)作人員(yuán)撤離(lí)現場(cháng)並經過(guò)20分鐘自淨後開(kāi)始(shǐ)
。
4.5 采樣點的確定(dìng) 
4.5.1 zui少采(cǎi)樣點數(shù)目(mù)見表1，每次zui小采(cǎi)樣量見表2
。
表1 zui少采(cǎi)樣(yàng)點數目(mù) ：

表2 zui小(xiǎo)采樣(yàng)量(liáng)：

4.5.2 采(cǎi)樣點位(wèi)置(zhì)布置宜力求均(jūn)匀(yún)，避(bì)免采樣點(diǎn)在(zài)局部區域過於稀疏，采樣點(diǎn)按照《潔淨區環(huán)境(jìng)監(jiān)控管理(lǐ)規程》附件×××車間(jiān)潔淨度監測采樣(yàng)點(diǎn)布(bù)局(jú)圖的(dí)要(yào)求(qiú)布(bù)置(zhì)，每個(gè)采(cǎi)樣(yàng)點(diǎn)一般(bān)采樣(yàng)一次(cì)
。
4.5.3 工作(zuò)區(qū)采(cǎi)樣點(diǎn)位置離地0.8m~1.5m左右（略高於工作麵），送風(fēng)口(kǒu)測點位置離(lí)開送(sòng)風麵30cm左右，可在(zài)關鍵(jiàn)設備(bèi)或關鍵(jiàn)工(gōng)作活(huó)動(dòng)範(fàn)圍(wéi)處增加(jiā)測(cè)點(diǎn)
。
4.6 測(cè)試準備
4.6.1 采(cǎi)樣(yàng)器在(zài)進入被(bèi)測(cè)區(qū)域前先(xiān)清(qīng)潔(jié)表麵，然(rán)後用75%酒精(jīng)消(xiāo)毒(dú)一(yī)遍或(huò)存(cún)放(fàng)於被測區(qū)域內(nèi)，與被測(cè)試(shì)區(qū)域一(yī)起消(xiāo)毒（用(yòng)於*無(wú)菌(jūn)室(shì)的(dí)采樣器必(bì)須(xū)預先放(fàng)在(zài)被(bèi)測房(fáng)間(jiān)內）
。
4.6.2 A/B級區采用(yòng)一(yī)次性培養皿，其它區(qū)域(yù)按無(wú)菌操作(zuò)要求(qiú)，在中(zhōng)檢(jiǎn)室(shì)潔淨(jìng)工(gōng)作(zuò)台上(shàng)提前(qián)製(zhì)備培養備用(yòng)（將(jiāng)滅菌後(hòu)的培養基(jī)用水(shuǐ)浴(yù)溶(róng)解(jiě)，冷卻(què)至(zhì)約(yuē)50-60℃，Φ90mm培養(yǎng)皿每(měi)個傾注(zhù)約20ml培養基，Φ150mm培每個傾(qīng)注約(yuē)30ml培養(yǎng)基），培養皿加(jiā)蓋後在(zài)室溫下(xià)放至凝固
。自(zì)製(zhì)好的(dí)培(péi)養(yǎng)皿(mǐn)在(zài)無(wú)菌室內(nèi)存放(fàng)不(bù)超(chāo)過(guò)48小時，2~8℃保存的培(péi)養皿一般不(bù)超(chāo)過1周(zhōu)，一(yī)次性培(péi)養皿(mǐn)在標注(zhù)的(dí)有(yǒu)效期內使用，過期(qī)不得(dé)使(shǐ)用
。
4.6.3 A/B級區使用的(dí)培養皿在區(qū)域(yù)消(xiāo)毒(dú)前一次(cì)性(xìng)傳入，隨(suí)環(huán)境(jìng)一起消毒(dú)，在消毒(dú)液(yè)取用間(jiān)架(jià)子(zǐ)上暫(zàn)存，在有效期內使用
。若需臨(lín)時(shí)傳入，則(zé)必(bì)須在(zài)前(qián)一天臭氧(yǎng)消毒(dú)前通(tōng)過(guò)C級與(yǔ)B級(jí)傳遞窗傳入(rù)B級區進(jìn)行臭(chòu)氧消(xiāo)毒，第二天使用
。傳入(rù)前(qián)表(biǎo)麵也必(bì)須用75%酒(jiǔ)精(jīng)擦拭
。其它區(qū)域用(yòng)培(péi)養皿(mǐn)按(àn)物(wù)品傳入(rù)要求當(dāng)天(tiān)傳(chuán)入(rù)使用(yòng)
。
4.6.4 采樣(yàng)前，先(xiān)用(yòng)75%酒(jiǔ)精(jīng)清洗采(cǎi)樣器的頂(dǐng)蓋，轉盤以及罩子(zǐ)的內外麵(miàn)（FKC型(xíng)浮(fú)遊(yóu)空氣塵(chén)菌采(cǎi)樣(yàng)器(qì)用酒(jiǔ)精(jīng)清(qīng)洗采樣頭(tóu)）
。
4.6.5 測(cè)試具(jù)體操(cāo)作(zuò)見(jiàn)“JYQ-Ⅱ型(xíng)浮遊菌采(cǎi)樣(yàng)器標準(zhǔn)操(cāo)作程(chéng)序(xù)或FKC-1型浮遊空(kōng)氣塵(chén)菌(jūn)采樣器(qì)標準(zhǔn)操作(zuò)程序(xù)”
。
4.6.6 采樣結束(shù)後(hòu)，蓋上培養皿(mǐn)蓋子，在培養皿(mǐn)上(shàng)標注(zhù)所有(yǒu)信息（包(bāo)括產(chǎn)品(pǐn)批號(hào)，放置位置(zhì)等），將培養皿用適宜(yí)的方(fāng)式捆(kǔn)紮，倒置於(yú)30~35℃恒(héng)溫培(péi)養(yǎng)箱中(zhōng)培(péi)養(yǎng)，培養時間不(bù)少(shǎo)於(yú)2天
。
4.6.7 培養結(jié)束後逐個檢查(chá)培(péi)養皿，用(yòng)肉(ròu)眼對(duì)培(péi)養(yǎng)皿上(shàng)所(suǒ)有的(dí)菌(jūn)落直接計(jì)數，標記，然後用5~10倍放大(dà)鏡檢(jiǎn)查(chá)，有(yǒu)否遺(yí)漏(lòu)
。若(ruò)培養皿上有2個或2個以(yǐ)上的菌落重疊，可分辨(biàn)時(shí)仍以2個或2個以上(shàng)菌(jūn)落計數(shù)
。
4.7 測(cè)試(shì)記(jì)錄(lù)應包含以(yǐ)下(xià)內(nèi)容
4.7.1 被(bèi)測試(shì)區(qū)域名稱，測試日(rì)期(qī)，測(cè)試(shì)依據(jù)，測(cè)試者姓名(míng)，測試(shì)儀器及(jí)測試方(fāng)法(fǎ)的(dí)描述(shù)，測試(shì)時所(suǒ)采(cǎi)用的(dí)狀態(tài)和室內(nèi)測試(shì)人(rén)員數，采樣點數目，測(cè)試(shì)次(cì)數，采樣(yàng)流量，測(cè)試(shì)結(jié)果（包(bāo)括(kuò)所(suǒ)有統計計算資(zī)料）等(děng)
。
4.7.2 若(ruò)為(wéi)動態測試，還應記錄現場操作人(rén)員(yuán)數(shù)量，現場(cháng)設備運轉情(qíng)況(kuàng)等
。
4.8 結(jié)果計算
4.8.1 用(yòng)計數(shù)方法(fǎ)得(dé)出(chū)各(gè)個培(péi)養(yǎng)皿的(dí)菌落(là)數
。
4.8.2 每(měi)個測點的浮遊(yóu)菌平均(jūn)濃度計算按下(xià)式進(jìn)行(háng)
。
4.9 結果(guǒ)評定(dìng)
4.9.1 每個測(cè)點(diǎn)的(dí)浮遊(yóu)菌平(píng)均濃度必(bì)須低(dī)於所(suǒ)選定評(píng)定(dìng)標準中(zhōng)的界限
。
4.9.2 在靜態(tài)測試(shì)時，若某測(cè)點(diǎn)的(dí)浮(fú)遊菌(jūn)平(píng)均菌(jūn)濃(nóng)度超過評定標準，則應(yīng)重新采樣(yàng)兩次(cì)，兩(liǎng)次(cì)測試結(jié)果均(jūn)合格才(cái)能判為符(fú)合
。
4.9.3 若(ruò)有超過規定者(zhě)，必須(xū)及時(shí)與生產(chǎn)部門，對該區域進(jìn)行消毒(dú)或其(qí)它處理(lǐ)，然後(hòu)重新測試至合(hé)格(gé)
。
4.10 日(rì)常(cháng)監控
4.10.1 浮遊菌(jūn)日常(cháng)監控設(shè)糾(jiū)偏限度和警(jǐng)戒(jiè)限(xiàn)度（限(xiàn)度範圍(wéi)及取(qǔ)樣(yàng)頻(pín)次見《潔淨區環境監(jiān)控(kòng)管(guǎn)理(lǐ)規(guī)程(chéng)》），以保證無菌(jūn)室(shì)（區(qū)）的微生物濃度受到(dào)控(kòng)製，定(dìng)期檢測(cè)以檢查微生物負(fù)荷以及消(xiāo)毒(dú)劑(jì)的效力(lì)，並作傾向(xiàng)分(fēn)析(xī)
。靜態(tài)和(hé)動態(tài)的監(jiān)控都(dū)可以采用該方法(fǎ)
。
4.10.2 對於(yú)浮(fú)遊菌的取樣頻次，如果(guǒ)出(chū)現下列情況應考慮(lǜ)修改，在評(píng)估(gū)以下(xià)情(qíng)況後，也(yě)應(yīng)確(què)定其他項(xiàng)目的(dí)檢測頻次(cì)
。
——連(lián)續(xù)超過糾偏(piān)限(xiàn)度(dù)和警戒限(xiàn)度
；
——停(tíng)工時間比預計延長
；
——關(guān)鍵區域內(nèi)發現有(yǒu)汙(wū)染存在
；
——在生產期間，空氣(qì)淨化係(xì)統進行(háng)任何重大的(dí)維(wéi)修
；
——日常操(cāo)作記(jì)錄反(fǎn)映(yìng)出(chū)傾向(xiàng)性(xìng)的數據(jù)
；
——消毒(dú)規程的(dí)改變(biàn)
；
——引起(qǐ)生物(wù)汙(wū)染(rǎn)的(dí)事故等
；
——當(dāng)生產(chǎn)設備有(yǒu)重(zhòng)大(dà)維(wéi)修或增(zēng)加設(shè)備(bèi)時
；
——當(dāng)無菌室（區(qū)）結構或(huò)區域(yù)分布(bù)有(yǒu)重(zhòng)大變動時
。
4.11 注意(yì)事(shì)項
4.11.1 JYQ-Ⅱ型(xíng)浮(fú)遊(yóu)菌采(cǎi)樣器經(jīng)消毒(dú)後先(xiān)不(bù)放入(rù)培(péi)養皿，開啟浮(fú)遊菌采(cǎi)樣器(qì)，使儀(yí)器中的(dí)殘餘消(xiāo)毒(dú)劑(jì)蒸發(fā)，時(shí)間不少於(yú)5分鐘，檢(jiǎn)查(chá)流量並(bìng)根(gēn)據(jù)采樣(yàng)量調整設(shè)定(dìng)采(cǎi)樣時間
。
4.11.2 單向流無菌(jūn)室(shì)（區(qū)）或送(sòng)風口，采樣(yàng)器采樣口(kǒu)朝向應正對(duì)氣流方(fāng)向，非單(dān)向(xiàng)流(liú)無菌(jūn)室(shì)（區），采(cǎi)樣口向上(shàng)
。
4.11.3 測(cè)試時必須穿著與被測(cè)區域(yù)潔淨(jìng)度級別(bié)要求相適(shì)應並(bìng)經(jīng)高壓滅(miè)菌後(hòu)的無菌服
。
4.11.4 布置采(cǎi)樣點(diǎn)時，至少應盡量(liáng)避(bì)開塵(chén)粒較集(jí)中的回(huí)風口
。
4.11.5 采樣結束(shù)，需用(yòng)75%酒(jiǔ)精噴(pēn)射(shè)采樣器罩子(zǐ)的內壁和轉盤（FKC型浮遊空(kōng)氣塵菌采樣器噴(pēn)射采樣頭和保(bǎo)護蓋(gài)）
。
4.11.6 應采取一(yī)切(qiē)措施(shī)防(fáng)止采樣(yàng)過程(chéng)的(dí)汙(wū)染(rǎn)和其他可(kě)能(néng)對(duì)樣(yàng)本的(dí)汙染
。
4.11.7 每批培養基應有(yǒu)對(duì)照試驗，檢(jiǎn)驗培養基本(běn)身是否汙(wū)染，可(kě)每批選定3隻(zhī)培養皿(mǐn)作(zuò)為(wéi)對(duì)照培養
；培養皿在用於檢(jiǎn)測時，為避免培(péi)養皿運(yùn)輸或(huò)搬動(dòng)過(guò)程(chéng)造成(chéng)的(dí)影(yǐng)響，宜同時(shí)進行對照試驗，每次或(huò)每個區域取1個對照皿(mǐn)，與(yǔ)采樣(yàng)皿(mǐn)同(tóng)法(fǎ)操(cāo)作但不(bù)需暴露(lòu)采樣，然後(hòu)與(yǔ)采樣後的培(péi)養皿一起放(fàng)入(rù)培養箱中(zhōng)培養，結果應(yīng)無(wú)菌落生(shēng)長
。
4.11.8 采樣前(qián)應(yīng)仔(zī)細檢查每(měi)個培(péi)養(yǎng)皿的(dí)質(zhì)量(liáng)，如發現變(biàn)質，破損(sǔn)或汙染(rǎn)的(dí)應(yīng)剔(tī)除
。
4.11.9 由於(yú)細(xì)菌(jūn)種類繁多，差別甚大，計數時一般(bān)用透射(shè)光於於培(péi)養(yǎng)皿背麵(miàn)或正麵(miàn)仔細觀(guān)察(chá)，不要漏(lòu)計(jì)培養皿邊緣生長(cháng)的(dí)菌落(là)，並(bìng)須注(zhù)意細菌菌(jūn)落或培養基沉澱物的(dí)區(qū)別，必(bì)要時(shí)用(yòng)顯微(wēi)鏡(jìng)鑒別
。
4.11.10 必須定(dìng)期(qī)對(duì)恒溫(wēn)培(péi)養(yǎng)箱(xiāng)進行(háng)校(xiào)驗(yàn)
。