無塵車間（無菌室）是微生物檢測(cè)的重要場所(suǒ)與zui基(jī)本(běn)的設(shè)施，因(yīn)此它(tā)的設(shè)計要按(àn)國(guó)家(jiā)標準(zhǔn)《潔(jié)淨廠房設計規(guī)範》，國(guó)家(jiā)藥(yào)品(pǐn)監督管(guǎn)理局(jú)頒發的《藥(yào)品(pǐn)檢(jiǎn)驗所(suǒ)實(shí)驗(yàn)室質量管理規(guī)範(fàn)（試行(háng)）》中第十(shí)八(bā)條(tiáo)規(guī)定執行(háng)。微生物實驗(yàn)室無塵車(chē)間的(dí)施(shī)工，安裝，驗收(shōu)應(yīng)按(àn)國家行(háng)業標(biāo)準(zhǔn)《無塵(chén)車間的(dí)施(shī)工及(jí)驗收規範》執行(háng)。對於微(wēi)生(shēng)物檢(jiǎn)測工作(zuò)者(zhě)和使(shǐ)用管理者(zhě)來講，更(gēng)大量(liáng)的(dí)工作(zuò)是(shì)進(jìn)行正(zhèng)常管(guǎn)理(lǐ)到日常的使用(yòng)。無塵車(chē)間(jiān)（無(wú)菌室(shì)）的標(biāo)準(zhǔn)要符合(hé)GMP潔淨度(dù)標準(zhǔn)要求(qiú)。
1，無(wú)塵車間(jiān)（無菌(jūn)室(shì)）要符(fú)合規範(fàn)要求
無菌(jūn)室(shì)應采光(guāng)良好，避(bì)免潮(cháo)濕，遠離廁所(suǒ)及(jí)汙染(rǎn)區(qū)。麵積一般不(bù)超過10m2，不小於5m2
；高(gāo)度不超過2.4m。由(yóu)1—2個(gè)緩衝間，操(cāo)作(zuò)間(jiān)組成(chéng)（操作間和緩衝(chōng)間的門不(bù)應(yīng)直(zhí)對），操作(zuò)間(jiān)和緩(huǎn)衝間(jiān)之間(jiān)應具(jù)備滅(miè)菌功(gōng)能的樣品傳遞(dì)箱。在緩衝(chōng)間(jiān)內應有洗(xǐ)手盆(pén)，毛巾(jīn)，無菌衣褲放置架及掛鉤(gōu)，拖鞋等，不應放(fàng)置培(péi)養(yǎng)箱和其他雜物
；無(wú)菌(jūn)室內(nèi)應六(liù)麵光滑(huá)平(píng)整，能(néng)耐(nài)受清洗(xǐ)消毒(dú)。牆壁與地麵(miàn)，天花(huā)板(bǎn)連接處應呈凹弧(hú)形(xíng)，無縫隙，不留死角。操(cāo)作間內(nèi)不(bù)應安裝下(xià)水(shuǐ)道。
無菌操作室(shì)應具(jù)有(yǒu)空氣除菌過(guò)濾的單(dān)向(xiàng)流(liú)空(kōng)氣(qì)裝置(zhì)，操(cāo)作區(qū)潔淨(jìng)度100級或放置同等級別(bié)的超淨(jìng)工作台，室(shì)內溫(wēn)度(dù)控製18—26℃，相(xiāng)對濕(shī)度(dù)45%—65%。緩衝(chōng)間(jiān)及(jí)操(cāo)作室內均(jūn)應(yīng)設(shè)置能達到(dào)空氣消毒(dú)效果的紫(zǐ)外燈或其他(tā)適(shì)宜的(dí)消毒裝置，空氣(qì)潔淨(jìng)級(jí)別不(bù)同的相(xiāng)鄰房(fáng)間(jiān)之(zhī)間的(dí)靜壓差應大(dà)於(yú)5Pa，無(wú)塵(chén)車間（區(qū)）與(yǔ)室外(wài)大氣的靜(jìng)壓差(chà)大於10Pa。無(wú)菌(jūn)室內的(dí)照明燈(dēng)應(yīng)嵌裝(zhuāng)在天花(huā)板(bǎn)內(nèi)，室(shì)內光照應(yīng)分(fēn)布(bù)均匀(yún)，光照度(dù)不低(dī)於300lx。緩衝間和操作(zuò)間所(suǒ)設置的紫外綫殺菌燈（2—2.5w/m3），應定(dìng)期檢查(chá)輻射(shè)強度，要(yào)求在操作麵(miàn)上達40uw/m2。不符合要(yào)求的紫外殺菌(jūn)燈(dēng)應及(jí)時更換。
2，建立使用(yòng)登記製度(dù)
在(zài)登(dēng)記(jì)冊中可設置(zhì)以下(xià)項目(mù)內容：如使用(yòng)日(rì)期(qī)，時間，使用人，設備(bèi)運(yùn)行(háng)狀況(kuàng)，溫(wēn)度，濕度(dù)，潔淨(jìng)度(dù)狀態（沉降菌(jūn)數，浮(fú)遊(yóu)菌數，塵埃粒子(zǐ)數(shù)），報修(xiū)原(yuán)因(yīn)，報修結果(guǒ)，清(qīng)潔工(gōng)作（台(tái)麵，地麵(miàn)，牆麵，天(tiān)花(huā)板(bǎn)，傳遞窗，門把手），消(xiāo)毒液(yè)名稱等(děng)。
3，建(jiàn)立使(shǐ)用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)範（SOP）並(bìng)嚴(yán)格管理(lǐ)
（1）規定淨化係統(tǒng)使(shǐ)運(yùn)轉時間(jiān)要求(qiú)每(měi)次(cì)實驗(yàn)前(qián)應開啟淨(jìng)化(huà)係統使運(yùn)轉(zhuǎn)至(zhì)少1h以上，同時(shí)開啟淨(jìng)化台(tái)和(hé)紫外(wài)燈。
（2）物(wù)品(pǐn)進(jìn)入無(wú)塵(chén)車間(jiān)（無菌(jūn)室）基本要求：凡(fán)進入(rù)無(wú)塵車(chē)間（無菌(jūn)室(shì)）的(dí)物品必須(xū)先(xiān)在*緩(huǎn)衝間內(nèi)對外部表(biǎo)麵(miàn)用消毒劑消毒(dú)滅(miè)菌，再經物流緩衝(chōng)間，傳(chuán)遞窗(chuāng)1h以上，及(jí)無(wú)菌(jūn)空氣吹幹後(hòu)送(sòng)入無(wú)菌(jūn)室。注(zhù)意(yì)帶(dài)纖(xiān)維，易發塵物(wù)品不得帶(dài)進(jìn)淨(jìng)化(huà)實驗室。無(wú)菌室(shì)內固定物品不得任(rèn)意搬(bān)出。
（3）人(rén)員(yuán)進入(rù)無(wú)塵(chén)車(chē)間（無(wú)菌(jūn)室）要(yào)求(qiú)：實驗人員進(jìn)入無塵車(chē)間(jiān)（無菌(jūn)室）不得(dé)化妝，帶手表(biǎo)，戒指(zhǐ)等(děng)首飾
；不得吃(chī)東(dōng)西(xī)，嚼口(kǒu)香(xiāng)糖。應(yīng)清潔(jié)手後進入*緩衝(chōng)間更(gēng)衣，同時(shí)換上消(xiāo)毒(dú)隔(gé)離(lí)拖(tuō)鞋，脫去外(wài)衣，用消(xiāo)毒(dú)液消毒雙手後戴上無(wú)菌(jūn)手(shǒu)套(tào)，換(huàn)上(shàng)無菌(jūn)連(lián)衣(yī)帽（不得讓(ràng)頭發，衣等暴(bào)露(lòu)在(zài)外麵），戴(dài)上無(wú)菌口(kǒu)罩(zhào)。然後戴(dài)上(shàng)第二副(fù)無菌手套，在(zài)進(jìn)入第二緩衝(chōng)間(jiān)時(shí)換(huàn)第二雙(shuāng)消(xiāo)毒隔(gé)離(lí)拖鞋。再經風淋(lín)室(shì)30s風(fēng)淋後進(jìn)入無菌室。
（4）溫(wēn)濕(shī)度觀(guān)察(chá)要(yào)求(qiú)：觀(guān)察(chá)溫(wēn)度計，濕(shī)度(dù)計(jì)上(shàng)顯(xiǎn)示的(dí)溫濕度是(shì)否在規定(dìng)的(dí)範(fàn)圍內，並作為實驗原(yuán)始(shǐ)數據(jù)記錄在(zài)案(àn)。如(rú)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題應及(jí)時(shí)尋找原因，及時(shí)報(bào)修(xiū)和(hé)及(jí)時報(bào)告實(shí)驗(yàn)室(shì)主管，並(bìng)將報修原因和結果記錄歸檔。
（5）沉降菌落(là)計數與(yǔ)浮遊菌(jūn)測(cè)定要(yào)求(qiú)：在(zài)每(měi)次(cì)實(shí)驗(yàn)同(tóng)時，對操作室和層(céng)流台(tái)做(zuò)微生物(wù)沉(chén)降菌(jūn)落(là)計數，將結果記錄在(zài)使用(yòng)登記本上(shàng)，並作(zuò)為(wéi)實驗環(huán)境(jìng)原始(shǐ)數(shù)據記(jì)錄在實(shí)驗報告上(shàng)。每周(zhōu)1次，或在(zài)無(wú)菌(jūn)檢查(chá)等必要(yào)時，在(zài)每次(cì)實(shí)驗(yàn)同(tóng)時對(duì)操作室(shì)和淨化(huà)台(tái)進(jìn)行(háng)浮(fú)遊菌測定，將結(jié)果記(jì)錄在(zài)使(shǐ)用登(dēng)記本上，並作為(wéi)實驗環(huán)境原(yuán)始數(shù)據(jù)記錄在實(shí)驗報(bào)告(gào)上(shàng)。
（6）消毒要求：無(wú)菌室每周和每(měi)次操(cāo)作前用0.1%新潔爾滅(miè)或(huò)2%甲(jiǎ)酚(fēn)液或其他(tā)適宜(yí)消(xiāo)毒(dú)液(yè)（常(cháng)用消(xiāo)毒劑的品種(zhǒng)有：5—20倍(bèi)稀釋(shì)的(dí)碘(diǎn)伏(fú)水溶(róng)液(yè)，0.1%新潔爾滅溶液，1：50的84消毒液(yè)，75%乙醇溶液，3%碘酒溶液(yè)，5%石炭(tàn)酸（來(lái)蘇兒）消毒溶液，2%戊二醛(quán)水(shuǐ)溶液，尼(ní)泊(bó)金(jīn)乙(yǐ)醇(chún)消(xiāo)毒液（處(chǔ)方(fāng)：對(duì)羥(qiǎng)基苯甲酸(suān)甲(jiǎ)酯(zhǐ)21.5g
；對羥基苯(běn)甲酸(suān)丙(bǐng)酯(zhǐ)8.6g，75%乙(yǐ)醇10ml）等，所用(yòng)的消(xiāo)毒劑(jì)品(pǐn)種(zhǒng)與使用要(yào)進(jìn)行有(yǒu)效性驗證(zhèng)方可(kě)使用(yòng)，並(bìng)定(dìng)期更(gēng)換(huàn)消毒(dú)劑的(dí)品(pǐn)種）擦拭(shì)操(cāo)作台(tái)及可能汙染(rǎn)的(dí)死角(jiǎo)，方法(fǎ)是(shì)用無菌紗(shā)布(bù)浸(jìn)漬消(xiāo)毒溶液清潔超(chāo)淨台(tái)的(dí)整個(gè)內表(biǎo)麵(miàn)，頂麵，及無菌(jūn)室(shì)，人(rén)流(liú)，物(wù)流(liú)，緩(huǎn)衝間的地板，傳遞窗，門把手(shǒu)。清(qīng)潔(jié)消(xiāo)毒程序(xù)應(yīng)從內向外(wài)，從高潔淨區到低潔淨區。逐步向外退出(chū)潔淨區(qū)域。然後開(kāi)啟無(wú)菌(jūn)空氣過(guò)濾(lǜ)器(qì)及(jí)紫外燈殺(shā)菌(jūn)1—2h，以殺(shā)滅(miè)存(cún)留(liú)微(wēi)生(shēng)物。在(zài)每次操作(zuò)完畢，同(tóng)樣用上述消毒溶(róng)液(yè)擦(cā)拭工(gōng)作台麵，除(chú)去(qù)室內濕氣，用紫(zǐ)外(wài)燈(dēng)殺(shā)菌(jūn)30min。
（7）其他要求(qiú)：如遇(yù)停電應(yīng)立即停止(zhǐ)實驗，離開無(wú)菌室，關閉(bì)所有(yǒu)電閘(zhá)。重新(xīn)進入無(wú)菌室(shì)前至少(shǎo)開啟機房運轉(zhuǎn)1h以上。
4，潔(jié)淨度檢(jiǎn)查的要(yào)求與方(fāng)法(fǎ)
無菌室在消(xiāo)毒處(chǔ)理(lǐ)後(hòu)，無(wú)菌試驗(yàn)前及操(cāo)作(zuò)過程中需檢(jiǎn)查空(kōng)氣中菌(jūn)落(là)數，以此(cǐ)來判斷(duàn)無菌(jūn)室(shì)是(shì)否達(dá)到(dào)規定(dìng)的潔(jié)淨度，常有沉降(jiàng)菌和浮遊菌測定方法(fǎ)。
（1）沉降(jiàng)菌檢測(cè)方法及(jí)標準：以無(wú)菌方式將(jiāng)3個營養瓊脂(zhī)平板帶入(rù)無(wú)菌操(cāo)作室(shì)，在操作(zuò)區(qū)台(tái)麵左，中(zhōng)，右各(gè)放(fàng)1個
；打(dǎ)開平(píng)板(bǎn)蓋，在空(kōng)氣(qì)中暴露(lòu)30min後將(jiāng)平板(bǎn)蓋(gài)好，置32.5℃士2.5℃培養(yǎng)48h，取(qǔ)出檢查(chá)，3個平(píng)板上生長的(dí)菌落(là)數平均小(xiǎo)於1個(gè)。
（2）浮遊菌檢測(cè)方法(fǎ)及(jí)標準(zhǔn)：用專(zhuān)門(mén)的采(cǎi)樣器，宜(yí)采(cǎi)用撞擊法機製的采(cǎi)樣器，一般采用(yòng)狹(xiá)縫(féng)式或(huò)離(lí)心式采(cǎi)樣器(qì)，並配(pèi)有(yǒu)流量計(jì)和定(dìng)時(shí)器，嚴格按(àn)儀器(qì)說明(míng)書(shū)的要求(qiú)操作(zuò)並定(dìng)時(shí)校檢(jiǎn)，采(cǎi)樣器和培養皿進入(rù)被(bèi)測(cè)房間前先(xiān)用(yòng)消毒(dú)房(fáng)間的(dí)消毒劑滅菌，使用的(dí)培養(yǎng)基(jī)為營養瓊脂培養基(jī)或(huò)藥(yào)典認可的其他培養(yǎng)基(jī)。使用時(shí)，先(xiān)開動(dòng)真(zhēn)空泵抽(chōu)氣，時間不少於(yú)5min，調節流(liú)量，轉(zhuǎn)盤(pán)，轉速。關閉(bì)真(zhēn)空泵，放(fàng)入培(péi)養(yǎng)皿，蓋(gài)上(shàng)采樣器蓋子後(hòu)調節縫隙(xì)高度。置采樣口(kǒu)采樣(yàng)點後，依(yī)次開啟(qǐ)采(cǎi)樣器，真(zhēn)空泵，轉動(dòng)定時(shí)器(qì)，根(gēn)據采樣(yàng)量設定采樣時間。全(quán)部(bù)采樣結束後，將培養皿置32.5℃士2.5培養48h，取出檢(jiǎn)查(chá)，浮遊菌落(là)數平均不得超過5個/m3。每批培(péi)養基應選(xuǎn)定3隻培(péi)養皿做對(duì)照培養(yǎng)。無菌操(cāo)作(zuò)台麵或超淨(jìng)工作台(tái)還應(yīng)定期檢(jiǎn)測其懸(xuán)浮粒子(zǐ)，應達(dá)到(dào)100級(jí)（一般用(yòng)塵埃(āi)粒子計數儀）檢測，並根(gēn)據(jù)無菌狀況必(bì)要時置(zhì)換(huàn)過(guò)濾器
5，定期進(jìn)行(háng)潔(jié)淨度(dù)再(zài)驗證
定期（每季度，半(bàn)年(nián)，1年）或(huò)當(dāng)無塵車間設施(shī)發(fā)生(shēng)重大(dà)改變時，要按國(guó)家標準GB/T16292-16294-1996《醫藥工(gōng)業無塵車(chē)間(jiān)（區）懸浮(fú)粒(lì)子，浮遊(yóu)菌(jūn)和沉(chén)降菌(jūn)的測試(shì)方法》進行(háng)潔淨度再驗(yàn)證(zhèng)，以確(què)保(bǎo)潔(jié)淨度符(fú)合(hé)規定，保(bǎo)存(cún)驗(yàn)證原(yuán)始記(jì)錄，定(dìng)期(qī)歸(guī)檔保存，並將驗(yàn)證結果(guǒ)記(jì)錄(lù)在無(wú)菌(jūn)室(shì)使(shǐ)用登記(jì)冊上(shàng)，作為實(shí)驗(yàn)環境原(yuán)始依(yī)據(jù)及(jí)趨(qū)勢分析(xī)資料。並(bìng)定(dìng)期(qī)對無(wú)塵(chén)車間的(dí)環(huán)境檢(jiǎn)測(cè)數(shù)據進行(háng)趨勢分析(xī)和(hé)評估(gū)，根據評(píng)估結(jié)果(guǒ)，了解(jiě)無塵車間(jiān)設(shè)施(shī)環境(jìng)質量的穩(wěn)定狀(zhuàng)況及變化趨勢(shì)，決(jué)定是否有必要修(xiū)訂(dìng)相應的警戒和(hé)糾(jiū)偏限(xiàn)度。
6，定期更換(huàn)新(xīn)的(dí)紫外燈(dēng)管
定期(qī)更(gēng)換淨化係統(tǒng)的初效，中(zhōng)效(xiào)，（至少每(měi)年(nián)1次(cì)），以確保淨(jìng)化係統(tǒng)的功(gōng)能持續(xù)有(yǒu)效
；更(gēng)換(huàn)新(xīn)的紫(zǐ)外燈(dēng)管(guǎn)，以(yǐ)確保紫外燈(dēng)管滅菌(jūn)持續有(yǒu)效(xiào)。並(bìng)同(tóng)時在(zài)使用(yòng)登記本(běn)上做好(hǎo)更換(huàn)記錄，定(dìng)期(qī)歸檔(dàng)保(bǎo)存，至(zhì)少(shǎo)2年1次，或(huò)按(àn)潔(jié)淨度(dù)驗證實(shí)際(jì)情況。
7，使(shǐ)用過程中(zhōng)應盡可(kě)能(néng)減少人員(yuán)的(dí)走(zǒu)動(dòng)或活動(dòng)
平(píng)時(shí)實驗室(shì)內應盡(jìn)可能(néng)減少(shǎo)人(rén)員的(dí)走動(dòng)或活(huó)動，同(tóng)向無塵車間的(dí)門要關(guān)閉(bì)或安裝(zhuāng)自動閉門(mén)器使其保持(chí)關(guān)閉(bì)狀(zhuàng)態。
8，潔淨度不符合規定時(shí)立即停止(zhǐ)使用
發現潔(jié)淨度不符合規(guī)定時，應立(lì)即停(tíng)止使(shǐ)用，尋找原因(yīn)，*清潔，必須(xū)經(jīng)潔淨度再(zài)驗證符(fú)合規(guī)定(dìng)後，才(cái)再(zài)使用，並(bìng)同時(shí)將(jiāng)情(qíng)況(kuàng)記錄在無菌室(shì)使用(yòng)登記冊上(shàng)，定期(qī)歸檔(dàng)保存(cún)。
9，對進入(rù)的外來(lái)人(rén)員或(huò)維修(xiū)人(rén)員進行指導(dǎo)和(hé)監督(dū)
非(fēi)微生物室(shì)檢(jiǎn)驗人員(yuán)不得進(jìn)入無塵車(chē)間(jiān)（無菌(jūn)室），對(duì)必(bì)須進入(rù)的外(wài)來人(rén)員(yuán)或(huò)維(wéi)修(xiū)人員要進行指導和(hé)監(jiān)督(dū)。
10，無塵車間（無(wú)菌(jūn)室(shì)）的(dí)日常(cháng)管理(lǐ)
建立安全衛生值日製度(dù)，一旦發(fā)現通風(fēng)係(xì)統，牆壁，天(tiān)花板，地麵，門窗及公(gōng)用介質(zhì)係統等(děng)設施有(yǒu)損壞(huài)現(xiàn)象(xiàng)，要(yào)及(jí)時報(bào)告並采(cǎi)取(qǔ)相應的修復措(cuò)施，並(bìng)保(bǎo)存記(jì)錄及時歸檔。從無塵(chén)車間（無菌(jūn)室(shì)）環(huán)境中(zhōng)檢測(cè)到的(dí)微(wēi)生(shēng)物應(yīng)能鑒(jiàn)別(bié)至屬或種，保留鑒別實驗原(yuán)始(shǐ)記錄及菌種，作為無菌生(shēng)產(chǎn)，無(wú)菌檢查(chá)無(wú)塵(chén)車間(jiān)環境(jìng)質量，消毒(dú)劑有效性評(píng)估(gū)及(jí)汙染(rǎn)源調(tiáo)查(chá)的(dí)依據。