一，目的
本規程旨(zhǐ)在為(wéi)無(wú)菌操(cāo)作及無菌室(shì)的(dí)保護提供一(yī)個標(biāo)準(zhǔn)化(huà)規程(chéng)。
二(èr)，適用範圍(wéi)
微生物檢(jiǎn)測實(shí)驗(yàn)室
三(sān)，責任者 QC主(zhǔ)管生測員(yuán)
四，安全(quán)注意(yì)事項(xiàng)
嚴(yán)格無(wú)菌(jūn)操(cāo)作
，防(fáng)止(zhǐ)微生物(wù)汙(wū)染(rǎn)；操作(zuò)人員(yuán)進入(rù)無(wú)菌室(shì)應先(xiān)關(guān)掉紫外燈(dēng)。
五，建造(zào)規程(chéng)
1，無(wú)菌室(shì)應(yīng)設有無菌操(cāo)作(zuò)間和緩衝間(jiān)
，無菌操(cāo)作(zuò)間潔(jié)淨度應達到10000級
，室(shì)內溫度(dù)保持在(zài)20-24℃
，濕度保持在45-60%。超淨台潔淨度應(yīng)達(dá)到100級。
2，無菌室應(yīng)保持(chí)清潔
，嚴禁堆(duī)放雜物(wù)
，以(yǐ)防(fáng)汙(wū)染(rǎn)。
3，嚴防一切(qiē)滅菌器(qì)材(cái)和(hé)培(péi)養基(jī)汙(wū)染
，已(yǐ)汙染者應停(tíng)止使用。
4，無菌(jūn)室(shì)應備(bèi)有工(gōng)作(zuò)濃(nóng)度的(dí)消毒(dú)液(yè)
，如5％的甲(jiǎ)酚(fēn)溶(róng)液(yè)
，70％的酒精(jīng)
，0.1％的新潔(jié)爾滅溶液(yè)
，等等。
5，無菌(jūn)室(shì)應(yīng)定(dìng)期(qī)用(yòng)適宜(yí)的消毒(dú)液滅菌清(qīng)潔(jié)
，以保證(zhèng)無(wú)菌室的(dí)潔(jié)淨度(dù)符合要(yào)求。
6，需要帶入無菌(jūn)室(shì)使用(yòng)的儀(yí)器
，器械(xiè)
，平皿(mǐn)等一(yī)切(qiē)物品
，均(jūn)應包紮(zā)嚴密(mì)
，並應(yīng)經過(guò)適(shì)宜的方法滅菌。
7，工作(zuò)人員進(jìn)入無菌(jūn)室前
，必須(xū)用(yòng)肥(féi)皂(zào)或(huò)消(xiāo)毒液洗手消毒(dú)
，然後在(zài)緩(huǎn)衝間(jiān)更換工(gōng)作服(fú)
，鞋(xié)
，帽(mào)子
，口罩和(hé)手(shǒu)套(或用(yòng)70%的乙醇再次(cì)擦拭(shì)雙手)
，方可進入(rù)無(wú)菌室(shì)進行操(cāo)作(zuò)。
8，無菌室使用(yòng)前(qián)必須打開(kāi)無菌(jūn)室的紫外燈輻(fú)照(zhào)滅菌30分鐘以上(shàng)
，並且(qiě)同(tóng)時(shí)打開超淨台進行吹(chuī)風。操作完畢
，應及時(shí)清(qīng)理無菌室
，再用(yòng)紫外(wài)燈輻照滅菌20分鐘。
9，供試品在(zài)檢查前
，應保持(chí)外(wài)包(bāo)裝完(wán)整
，不(bù)得開啟
，以防汙染。檢查前(qián)
，用(yòng)70％的(dí)酒精棉(mián)球消毒外(wài)表麵。
10，每(měi)次操作(zuò)過程中(zhōng)
，均應(yīng)做陰性(xìng)對照
，以(yǐ)檢查無(wú)菌操作的可靠(kào)性。
11，吸取菌液時(shí)
，必須用(yòng)吸耳球(qiú)吸(xī)取
，切勿直接(jiē)用口(kǒu)接(jiē)觸吸(xī)管。
12，接種針(zhēn)每(měi)次(cì)使用(yòng)前後
，必須通過火焰灼燒(shāo)滅(miè)菌
，待冷卻後(hòu)
，方可(kě)接種培(péi)養物。
13，帶(dài)有菌液(yè)的(dí)吸管(guǎn)
，試(shì)管(guǎn)
，培養(yǎng)皿等(děng)器皿(mǐn)應浸(jìn)泡(pào)在盛有(yǒu)5%來蘇爾(ěr)溶(róng)液的(dí)消(xiāo)毒(dú)桶內消毒(dú)
，24小時(shí)後取(qǔ)出(chū)衝洗。
14，如有菌(jūn)液灑(sǎ)在桌上(shàng)或地上
，應立即(jí)用5%石碳酸(suān)溶液或3％的(dí)來蘇(sū)爾傾(qīng)覆在(zài)被汙染(rǎn)處(chǔ)至(zhì)少(shǎo)30分鐘(zhōng)
，再做處理。工(gōng)作衣(yī)帽等(děng)受到(dào)菌(jūn)液(yè)汙染(rǎn)時(shí)
，應立(lì)即脫去
，高(gāo)壓蒸(zhēng)汽(qì)滅菌(jūn)後洗滌。
15，凡帶有活菌(jūn)的物(wù)品(pǐn)
，必(bì)須經消毒(dú)後
，才(cái)能(néng)在(zài)水下衝洗
，嚴(yán)禁汙染(rǎn)下水道(dào)。
16，無(wú)菌室應(yīng)每(měi)月(yuè)檢查菌(jūn)落數。在(zài)超淨工作(zuò)台開啟的狀(zhuàng)態下
，取(qǔ)內徑90mm的(dí)無(wú)菌(jūn)培養(yǎng)皿若(ruò)幹(gān)
，無菌(jūn)操作分(fēn)別注(zhù)入(rù)融化並冷卻(què)至(zhì)約(yuē)45℃的(dí)營養瓊(qióng)脂培(péi)養(yǎng)基約15ml
，放(fàng)至(zhì)凝固後
，倒置(zhì)於(yú)30～35℃培(péi)養箱培(péi)養(yǎng)48小時
，證(zhèng)明(míng)無菌後
，取平(píng)板3～5個
，分別放置(zhì)工(gōng)作位(wèi)置的左中右等處
，開蓋暴(bào)露30分(fēn)鐘後
，倒置於(yú)30～35℃培(péi)養箱(xiāng)培養48小時(shí)
，取出檢查。100級(jí)潔(jié)淨區(qū)平板(bǎn)雜(zá)菌數平均不得超(chāo)過1個菌落
，10000級潔(jié)淨室平均不(bù)得超過(guò)3個(gè)菌落。如超過(guò)限(xiàn)度
，應對無(wú)菌室(shì)進行(háng)*消(xiāo)毒
，直至重(zhòng)復(fù)檢查合乎(hū)要(yào)求為止。
六(liù)，參照 《藥(yào)品衛生檢(jiǎn)驗方(fāng)法》 《中國(guó)藥(yào)品(pǐn)檢驗(yàn)標準操作規範》中 (無(wú)菌(jūn)檢查法)章(zhāng)節(jié) 中華(huá)人(rén)民(mín)共和(hé)國(guó)醫(yī)藥行業標(biāo)準 YY/T0188.6-1995《藥(yào)品檢驗(yàn)操作規程》
七(qī)，適用部(bù)門
質(zhì)量管理(lǐ)部
八(bā)，無菌(jūn)室技術指(zhǐ)導(dǎo)說明
在(zài)獲(huò)得了無(wú)菌環(huán)境和無(wú)菌材料後(hòu)
，我們還要保持無菌狀態(tài)
，才(cái)能(néng)對某種特(tè)定(dìng)的(dí)已知(zhī)微(wēi)生(shēng)物(wù)進行研(yán)究(jiū)或(huò)利用它(tā)們(mén)的(dí)功(gōng)能
，否則外(wài)界的(dí)各(gè)種(zhǒng)微生物(wù)很(hěn)容(róng)易(yì)混入(rù)。外(wài)界不(bù)相(xiāng)幹的微生物混(hùn)入的現(xiàn)象(xiàng)
，在(zài)微(wēi)生(shēng)物學中我(wǒ)們(mén)叫(jiào)做(zuò)汙染(rǎn)雜菌(jūn)。防(fáng)止(zhǐ)汙染是微生物學(xué)工(gōng)作中十(shí)分(fēn)關(guān)鍵(jiàn)的技術(shù)。一(yī)方(fāng)麵(miàn)是*滅(miè)菌
，另一(yī)方麵(miàn)防止汙(wū)染(rǎn)
，是無菌技術的兩個方麵(miàn)。另(lìng)外
，我們(mén)還要(yào)防止(zhǐ)所(suǒ)研(yán)究(jiū)的(dí)微(wēi)生物(wù)
，特別是(shì)致病微(wēi)生物或(huò)經過基(jī)因(yīn)工程(chéng)改造了的本來(lái)自然界不存(cún)在的(dí)微生物從(cóng)我們(mén)的實(shí)驗(yàn)容器中(zhōng)逃逸到外界環境(jìng)中(zhōng)去。為了這(zhè)些(xiē)目(mù)的
，在(zài)微生物(wù)學中(zhōng)
，有(yǒu)許多(duō)措施(shī)。
無(wú)菌(jūn)室(shì)一般是在(zài)微(wēi)生物實驗室(shì)內專辟(bì)一個(gè)小房(fáng)間(jiān)。選(xuǎn)用彩(cǎi)鋼板及(jí)鋼(gāng)化(huà)玻璃建(jiàn)造(zào)。麵積不宜過(guò)大
，約5-20平(píng)方米(mǐ)即可(kě)
，高2.5米左(zuǒ)右(yòu)。無(wú)菌室(shì)外(wài)要設一(yī)個(gè)緩(huǎn)衝(chōng)間(jiān)
，緩(huǎn)衝間的(dí)門和(hé)無(wú)菌(jūn)室的(dí)門(mén)不(bù)要朝向同一方向
，以(yǐ)免(miǎn)氣流(liú)帶(dài)進雜菌。無(wú)菌室和(hé)緩衝(chōng)間(jiān)都(dū)必須(xū)密(mì)閉。室(shì)內裝備(bèi)的(dí)換氣(qì)設備必須有(yǒu)空氣(qì)過(guò)濾(lǜ)裝(zhuāng)置。無(wú)菌(jūn)室內的(dí)地(dì)麵，牆壁必須(xū)平(píng)整
，不(bù)易(yì)藏汙納(nà)垢
，便於清洗。工作台的台(tái)麵應該(gāi)處於水平(píng)狀(zhuàng)態。無菌(jūn)室和緩衝(chōng)間都(dū)裝(zhuāng)有紫(zǐ)外綫燈
，無(wú)菌(jūn)室(shì)的紫外(wài)綫(xiàn)燈(dēng)距(jù)離(lí)工(gōng)作(zuò)台麵(miàn)1米。工作人(rén)員(yuán)進入(rù)無(wú)菌室應穿滅過菌的(dí)服(fú)裝
，戴(dài)帽子。
當前(qián)無(wú)菌室多存在於微生(shēng)物工(gōng)廠(chǎng)
，一般(bān)實(shí)驗室則(zé)使(shǐ)用(yòng)超(chāo)淨(jìng)台。超淨台其主要功(gōng)能是(shì)利(lì)用(yòng)空氣(qì)層(céng)流(liú)裝(zhuāng)置(zhì)排除工(gōng)作台麵(miàn)上部包(bāo)括(kuò)微(wēi)生物(wù)在(zài)內(nèi)的各(gè)種微小(xiǎo)塵(chén)埃(āi)。通過(guò)電動裝置使空(kōng)氣通(tōng)過過(guò)濾器具(jù)後進入工作(zuò)台麵(miàn)
，使台(tái)麵始(shǐ)終(zhōng)保持在流(liú)動無菌空(kōng)氣(qì)控(kòng)製(zhì)之(zhī)下。而且在接(jiē)近(jìn)外部(bù)的一(yī)方有(yǒu)一道高速(sù)流(liú)動的氣簾(lián)防(fáng)止外(wài)部(bù)帶菌空(kōng)氣進(jìn)入。